無論是選擇國產(chǎn)還是進口的qPCR儀,首先要從儀器光學(xué)檢測的技術(shù)方案來著手,因為這是qPCR 儀的核心技術(shù),它決定了實驗的準(zhǔn)確性、可靠性和重復(fù)性。一臺出色的qPCR儀需要具備哪些特點呢?
一、采用頂部檢測CCD技術(shù)
目前來看,頂部檢測CCD技術(shù)是定量PCR儀的最佳技術(shù)方案。國內(nèi)頂尖qPCR儀和國外主流qPCR儀都采用這種技術(shù),這種頂部檢測技術(shù)采用相機原理,直接從PCR管的上方對樣品進行實時檢測,采光面平行性好,采光面積大,因此小體積反應(yīng)液都能放心使用。
眾所周知,采用頂部檢測技術(shù)的 qPCR儀所需要的反應(yīng)體積只需5-10ul即可,(而其他檢測方案的qPCR儀至少需要20ul以上),從而很大程度地降低了實驗成本。實驗達人們最清楚qPCR試劑有多貴了,能省一半的試劑就是省下大把的銀子啊。
二、能用0.1ml白管
這里告訴你一個獲得最佳結(jié)果的訣竅——就是改變習(xí)慣,使用白管。因為不透明的白管能屏蔽背景噪音,即使樣品井有點臟都沒有關(guān)系。另外,白管還能減少光的折射損失,信噪比和靈敏度更高,因此可獲得比透明管更佳的實驗效果。頂部檢測CCD方案絕配白管,可實現(xiàn)1+1>2的優(yōu)勢。
另外,0.1ml管由于光程比0.2ml管更短,因而熒光信號更穩(wěn)定,靈敏度更高。
三、升降溫速率越快越好
無論是普通pcr儀還是熒光定量pcr儀,升降溫速率都決定了實驗所需的時間,當(dāng)然是越快越好。能快速達到目標(biāo)溫度,從而縮短實驗時間和提高工作效率肯定是一臺優(yōu)秀的qPCR儀應(yīng)具備的品質(zhì)。而對于PCR儀的變溫速率來說,每秒增加1度都是半導(dǎo)體技術(shù)的一次飛躍。