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    普通0.2ml管和0.1ml管對(duì)qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)有什么不同的影響？
    首先，我們先來看一下市場(chǎng)上這些主流qPCR儀，比如國(guó)外的ABI的7500 Fast，Roche的LightCycler96和LightCycler480，Bio-Rad的CFX96 Touch，等以及國(guó)內(nèi)的朗基Q1000/Q1000+和Q2000系列，它們都已經(jīng)以0.1ml管為標(biāo)配耗材，像賽默飛更是向定量PCR用戶推薦優(yōu)先選擇低容（0.1ml）耗材。趨勢(shì)已來，勢(shì)不可擋。

    那么在定量PCR實(shí)驗(yàn)中，為什么0.1mlPCR管比普通0.2ml管有著天然的優(yōu)勢(shì)呢？

    首先我們看外形，普通管要比0.1ml管高很多（見圖1）。

? 縮小死體積，避免掛壁冷凝水

    當(dāng)加入同樣體積的反應(yīng)液時(shí)，相比0.2ml管，0.1ml管的反應(yīng)液上方空間（也稱死體積)則相對(duì)小得多，浪費(fèi)的空間就更少（見圖2）。實(shí)驗(yàn)中隨著樣品臺(tái)逐漸升溫，管內(nèi)加熱后產(chǎn)生的水蒸氣會(huì)進(jìn)入上方空間，普通管容納了更多的水蒸氣，導(dǎo)致反應(yīng)液被濃縮，反應(yīng)液成分的變化進(jìn)而影響到導(dǎo)熱性和液體溫度，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性和精確性。相反，對(duì)于0.1ml管來說，就會(huì)大大減少死體積，使得反應(yīng)成分更穩(wěn)定，重復(fù)性更好。

    另外，由于普通管中的水蒸氣要經(jīng)過更長(zhǎng)距離的裸露部分才能到達(dá)頂部的熱蓋處（見圖3），不可避免地導(dǎo)致一些冷凝水掛壁現(xiàn)象的形成，這對(duì)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)是致命的。因?yàn)閽毂诘睦淠拖褚粋€(gè)個(gè)微型透鏡，造成熒光的折射和散射，劣化并衰減檢測(cè)器信號(hào)的一致性，降低靈敏度。

    而0.1ml管由于被樣品臺(tái)充分包裹，裸露在樣品臺(tái)外面的部分極少，與熱蓋的距離也更近，大大降低了掛壁冷凝水的產(chǎn)生，以及冷凝水污染的可能性，當(dāng)然實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)就更準(zhǔn)確啦。

圖2 

圖3    

? 短光程，提高熒光捕獲率

    由于試劑成本越來越高，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的反應(yīng)體積越來越小，最常見就是20-25ul，甚至在定量PCR實(shí)驗(yàn)中，5-10ul的用戶也是屢見不鮮，對(duì)0.1ml管來說綽綽有余，即使加50ul 也不在話下